遺伝子

プラスミドの設計・調製
ウイルスの設計・調製
組換え・変異体解析など

遺伝子領域における主な技術ラインナップ

LineupNo.01

Gene

プラスミドの設計・調製

siRNA耐性の変異体の作製、発現調整配列の導入などのカスタマイズに対応可能です。
使用目的に応じた精製レベルをご提案します。

LineupNo.02

Gene

ウイルスの設計・調製

ウイルス調製用プラスミドの設計・構築から承ります。
調製したウイルスを使用しての細胞の機能解析も可能です。

LineupNo.03

Gene

組換え・変異体解析

サザンブロットでのプローブ設計、制限酵素の選択、PCRでのプライマー設計等、試験系の構築から承ります。

遺伝子領域における主な事例紹介

LineupNo.01

Gene

プラスミドの設計・調製

強制発現・
調節性発現用

哺乳類細胞用遺伝子発現ベクタープラスミドの調製

ご指定いただいた遺伝子のアミノ酸コード領域をcDNAからPCR増幅し、N末端にMyc-tagを付加した状態で哺乳類用発現ベクタープラスミドに挿入する。挿入配列を確認後、Mini-prepサイズのプラスミドを提出する。

提出物 金額 期間
プラスミド、プラスミド情報 130,000円~ 1か月程度
出芽酵母内でのウイルスベクタープラスミドの構築

Nature 582: 561-565 (2020) の報告に基づき、出芽酵母内でDNA断片をつなぎ合わせ、感染力を欠失させたウイルスのゲノム (>20kb) をプラスミドとして構築する (ウイルスベクタープラスミド)。その後、酵母からDNAを抽出し、それを元に大腸菌を形質転換させ、ウイルスベクタープラスミドを抽出、精製する。

提出物 金額 期間
プラスミド、報告書 1,200,000円 ~ 3か月程度

ノックダウン用
(siRNA、shRNA)

遺伝子ノックダウン用shRNA/siRNA発現
レンチウイルス調製用プラスミドの構築

ご提供いただいた基本レンチウイルス調製用プラスミドにshRNA/siRNA配列を導入し、プラスミドを提出する。

提出物 金額 期間
プラスミド、プラスミド情報 130,000円~ 1か月程度

遺伝子編集用
(CRISPR/Cas9)

guide RNA/Cas9発現プラスミドの構築

ご指定いただいた遺伝子を機能不全にさせるように切断するguide RNAを3種類設計し、その切断効率を細胞を用いて評価する。最も切断効率の良かった guide RNA と Cas9 を発現するプラスミドを調製し、提出する。

提出物 金額 期間
プラスミド、プラスミド情報 700,000円~ 2か月程度

LineupNo.02

Gene

ウイルスの設計・調製

レンチウイルス/
レトロウイルス

遺伝子強制発現用レンチウイルスの調製

哺乳類細胞において発現させたい遺伝子をご指定いただき、目的用途に適したレンチウイルス調製プラスミドを設計・構築する。そのプラスミドを用いて、レンチウイルスを調製し、提出する。

提出物 金額 期間
ウイルス、報告書 700,000円~ 2か月程度

アデノ随伴
ウイルス

アデノ随伴ウイルスの調製

293系浮遊細胞 (30mL x 6) にアデノ随伴ウイルス調製用のプラスミドを導入し、72時間振盪培養後、培養細胞の細胞質からAAV粒子を回収する。qPCRによるAAVゲノム測定により、ウイルス量を算定する。

提出物 金額 期間
ウイルス、報告書 1,200,000円~ 1か月程度

アデノウイルス

遺伝子強制発現用アデノウイルスの調製

発現させたい遺伝子を元にアデノウイルス調製用コスミドを設計・構築する。このコスミドを用いてアデノウイルスを調製し、力価測定結果と共に提出する。

提出物 金額 期間
ウイルス、報告書 1,800,000円~ 2か月程度

LineupNo.03

Gene

組換え・変異体解析

サザンブロット
(non-RI)

サザンブロット解析

検出したいDNAについて、ヒアリングを行い、使用する制限酵素の選択および検出用プローブの設計を行う。ご提供いただいたDNAを制限酵素処理、電気泳動を行い、ナイロンメンブレンへと転写する。その後、作成したプローブをハイブリダイズさせ、non-RI (化学発光) で検出する。

提出物 金額 期間
報告書 400,000円 ~ 1か月程度

ジェノタイピング
PCR

ノックアウトマウスの遺伝子型判定

ご提供いただいたノックインコンストラクトの情報に基づき、ノックアウトマウスの遺伝子型判定 (ジェノタイピング) 用のPCRプライマーを設計し、機能することを確認する。ご提供いただいた20匹分のマウス尾サンプルについて、設計したプライマーを使用したPCRを行い、ジェノタイピングを行う。

提出物 金額 期間
報告書 300,000円~ 1か月程度