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4種類の導入試薬を用いて、各種条件で細胞株に核酸を導入した。導入24、48時間後に細胞からRNAを抽出し、標的遺伝子Aおよび内部標準遺伝子Bの発現量をリアルタイムPCRで定量的に評価した。

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ヒト線維芽細胞からRNAを抽出し、6種類の標的遺伝子の発現量をリアルタイムPCRで評価した。

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委託者より提供された陽性対照となる細胞からタンパク質抽出液を調製した。そして、抗体Aおよび抗体B並びにβ-アクチンに対する抗体を用いたウエスタンブロットを行い、標的タンパク質が検出されるか否かを確認した。

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標的遺伝子に対するリアルタイムPCR (SYBR Green I) 用のプライマーを設計した。提供いただいたRNA中の標的遺伝子の発現量をβ-アクチンに対する相対発現量として定量的に評価した。

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CHO系細胞を用いて3種類の組換え抗体の発現条件の検討を行った。そして、細胞培養上清中の組換え抗体の状態を還元/非還元のSDS-PAGE により解析した。

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提供いただいた3種類の培養プレート上で哺乳類細胞を培養した。2種類の増殖阻害剤をそれぞれ、段階希釈して添加し、その後の細胞増殖をMTSアッセイで評価した。

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正常ヒト新生児表皮角化細胞に対して、被験物質存在下で過酸化水素を添加し、培地交換後、DCFDA/H2DCFDA-Cellular ROS Assay Kitを用いて、過酸化水素の細胞透過度を評価した。

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正常ヒト新生児表皮角化細胞に対して、被験物質存在下で紫外線 (UVB) を照射し、生成される活性酸素種 (ROS) の量をDCFDA/H2DCFDA-Cellular ROS Assay Kitを用いて評価した。

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正常ヒト新生児表皮角化細胞に対して、被験物質存在下で過酸化水素を添加し、産生されるIL-1αの量をELISAにて評価した。

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正常ヒト新生児表皮角化細胞に対して、被験物質存在下で紫外線 (UVB) を照射し、産生されるプロスタグランジンE2 (PGE2) の量をELISAを用いて評価した。

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正常ヒト新生児表皮角化細胞に対して、被験物質存在下で紫外線 (UVB) を照射し、一酸化窒素 (NO) の量をQuantiChrom Nitric Oxide Assay Kit を用いて評価した。

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正常ヒト新生児表皮角化細胞に対して、被験物質存在下で紫外線 (UVB) を照射し、IL-1αの産生量をELISAにて評価した。

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提供いただいた9種類の培養器具のそれぞれについて、タンパク質吸着試験、エンドトキシン試験、細胞接着試験を実施した。

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5種類の被験物質をヒト乳がん細胞株に添加し、WSTアッセイを行い、被験物質の細胞増殖に与える影響を評価した。また、マイクロアレイによる発現解析を行うため、被験物質を添加した細胞からRNAを抽出、精製した。

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提供された細胞に3種類のプラスミドをそれぞれ、リポフェクションにより導入した。その後、細胞を回収し、ホルマリン固定を行い、提出した。

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提供いただいた細胞を拡大培養し、凍結ストック (>1x10^6 cells/vial x 14本) を調製した。

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4種類の菌類を培養し、加熱により不活性化後、指定の菌濃度に調製し、提出した。

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培養細胞に被験物質を添加し、分泌された副腎皮質ホルモンをELISAにて測定した。

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被験物質が筋肉の発達・成長に及ぼす効果を検討するために、C2C12細胞の分化におけるエネルギー産生関連遺伝子の発現量を調べた。

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被験物質を培養細胞に添加した際の食欲関連因子の分泌促進効果を調べた。食欲関連因子はAlphaLISAにて測定した。同時に、被験物質を培養細胞に添加した際の細胞傷害性を測定した。

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血液から細胞を分離後、被験物質を添加して一定期間培養し、ELISAにてサイトカインを測定した。

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培養細胞に植物エキスを添加し、ストレス関連ホルモン受容体のmRNA発現量をリアルタイムPCRにて評価した。

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cDNA 230種についてSYBR Green I を用いたインターカレーション法にて計3,720検体のリアルタイムPCRを実施した。

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SDS-PAGEによる補体活性評価系を構築し、活性化阻害剤の評価 (IC50の算出) を行った。

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培養細胞にて脂肪蓄積を誘導し、蓄積に対する阻害剤の評価 (IC50の算出) を行った。

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皮膚線維芽細胞の老化モデルを作製し、標的遺伝子発現量をリアルタイムPCRにて正常細胞と比較した。

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メラノサイトに植物エキスを添加し、メラニン量を測定することでメラニン産生抑制効果を評価した。

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マウスの大脳皮質から神経細胞およびアストロサイトを単離、共培養した。被験物質添加後の各種代謝量を測定し、代謝評価系として機能することを確認した。

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培養細胞を用い、siRNAによる標的遺伝子のノックダウンを行い、関連遺伝子のmRNA量をリアルタイムPCR (TaqMan法) にて評価した。

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植物エキスの抗酸化能を評価し (Trolox等価活性)、抗菌作用 (IC50) を評価した。

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癌細胞株にレポータープラスミドを導入しプロモーターアッセイ系を構築した後、約300種の被験物質について、プロモーター活性への影響を評価した。

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関節炎に関連して、軟骨細胞におけるII型コラーゲン及び滑膜細胞における炎症性サイトカインをELISAにて定量した。

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ルシフェラーゼを発現するレポーター細胞を用いて、開発素材の細胞への効果を定量的に評価した。

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癌細胞株に化合物を作用させ、通常培養条件下と低酸素培養条件下で細胞増殖を比較した。また、培養上清中の低分子化合物をHPLCにより測定した。

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被験物質が筋肉の発達・成長に及ぼす効果を検討するために、C2C12細胞の分化におけるミトコンドリア量の変化に与える影響を検討した。

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分泌タンパク質AのStrepタグ融合タンパク質を哺乳類浮遊細胞で発現させ、培養上清からStrepTactinアフィニティー精製を行った。

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ヒトの酵素のFLAGタグ融合タンパク質を哺乳類浮遊細胞で発現させ、アフィニティー精製を行った。

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化合物がヒト酵素の翻訳後修飾に与える影響を検討するために、FLAGタグ融合タンパク質を哺乳類浮遊細胞で発現させ、アフィニティー精製後、SDS-PAGEにより分離し、目的タンパク質のバンドを切り出し提出した。

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試験委託者よりご提供いただいたハイブリドーマの拡大培養・凍結ストックの作製を行った。また、培養上清150 mLを用いて、Protein Gセファロースにより、抗体を精製した。

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増殖因子刺激によるヒト表皮角化細胞株のヒアルロン酸産生アッセイ系を確立するために、ELISAにより増殖因子量依存性を検討した。

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増殖因子刺激によるヒト表皮角化細胞株の細胞増殖アッセイ系を確立するために、WST-8により増殖因子量依存性を検討した。

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被験物質がブルーライトからの保護効果を有するかを検討するために、正常ヒト成人皮膚由来繊維芽細胞および正常ヒト成人表皮由来角化細胞を用いて、LED照射実験を行った。LED照射下で、被験物質が細胞増殖やサイトカイン産生に与える影響を検討した。

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食品原材料から抽出した分離画分5種が血管機能改善効果を示す可能性があるか検討するために、ヒト臍帯静脈内皮細胞のNO産生に与える影響を、Griess試薬を用いて測定した。

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抗癌剤の候補化合物が、癌細胞株の翻訳開始因子の複合体形成に影響を与えるかを、プルダウンアッセイにより検討した。

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抗癌剤の候補化合物が、癌細胞株の増殖に与える影響を検討した。

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ヒト線維芽細胞の初代培養を用い、各種刺激によるAkt、Stat3、Stat6のリン酸化を、各リン酸化タンパク質特異的抗体を用いたウエスタンブロッティングにより検出した。

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ヒト線維芽細胞の初代培養を用い、IL-4刺激によるターゲットタンパク質のリン酸化を、各リン酸化タンパク質特異的抗体を用いたウエスタンブロッティングにより検出した。

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癌細胞株を、10枚のT-225フラスコに拡大培養し、無血清培地に置換後2日間培養し、培養上清を回収・清澄化し、提出した。

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ご提供頂いた哺乳類細胞をCO2濃度8%下で振とう培養し、凍結細胞ストックの作製、および1 Lの培養上清の調製を行った。

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酵母の培養における、各種培地や環境の条件を最適化するため、20条件に付いて、細胞密度、酸素濃度、pH、分泌ペプチドの測定を経時的に10時間ずつ行った。

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被験物質が光刺激依存的な神経活動に与える影響を検討するために、マウスから生体切片を調製し、微小電極アレイ法のより神経細胞の活動を測定した。

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提供いただいた開発中の細胞培養関連製品を用いて細胞を培養し、細胞増殖をWST assayで測定し、細胞毒性を評価した。

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RAW264.7細胞から破骨細胞誘導する系を用い、被験物質の破骨細胞分化抑制作用を評価した。

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特定の細胞に分化した場合に培養液中にマーカータンパク質を分泌するヒト間葉系幹細胞 (MSC) の調製を行った。細胞種特異的な活性を持つプロモーターと分泌型アルカリ性フォスファターゼのユニットを持つレンチウイルスを調製した。それをMSCへと感染させた後、薬剤選択により、ウイルス感染細胞を単離した。

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ヒトiPSCニューロンに被験物質及び陽性/陰性対照化合物を作用させ、得られたデータを元に人工知能ＡＩで解析することで、中枢毒性や神経機能のフェノタイプを評価

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ヒトiPSCニューロンに被験物質及び陽性/陰性対照化合物を作用させて得られたデータを人工知能ＡＩで解析し、中枢毒性のプロファイルを評価した。また、既に取得している動物試験結果との相関性を検証した。

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CRISPR/Cas9システムと開発中の遺伝子編集システム、それぞれを用いて、哺乳類細胞のHPRT1遺伝子を遺伝子編集（ノックアウト）した。それら細胞を用いて、HATアッセイを行い、変異体出現頻度から、CRISPR/Cas9システムと開発中のシステムとの遺伝子編集効率を比較した。

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陽性対照となる細胞を用いたウエスタンブロットを行い、標的遺伝子産物に対する複数種類の抗体から、機能的なものを選別した。siRNAを導入した細胞において、選択した抗体を用いたウエスタンブロットを行い、siRNAによる遺伝子発現抑制を評価した。

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ヒト血液検体から各種キット等を用いて、特定の細胞種を分離したうえ、開発中の測定機器でそれらを測定し、データを取得した。FTEとして、委託者の要望に応じて、選別細胞種を臨機応変に変更しながら、継続的に実施した。

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提供いただいた被験物質に対する線虫の走化性並びに活動性を撮影した動画を解析し、評価した。

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標的遺伝子に対するguideRNAとCas9を発現するレンチウイルスベクターを調製した。そして、提供いただいた細胞に感染させ、感染が成立した細胞を薬剤により選択した。

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試験概要

細胞Aの増殖活性を指標にした被験物質Iの生理活性評価系の構築を行った。細胞の播種数、被験物質の添加濃度、培養期間の検討を行い、それぞれについての至適条件を決定した。
また、細胞Bの酵素活性を指標にした被験物質IIの生理活性評価系の構築を行った。細胞の播種数、被験物質の添加濃度、培養期間の検討を行い、それぞれについての至適条件を決定した。

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4種類の被験物質をハムスター皮脂腺細胞培養系に添加し、その後の皮脂合成量をオイルレッドO染色と波長520nmの吸光度により評価した。

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His-tag標識されたタンパク質Aと細胞抽出液を混合後、ニッケル・セファロースビーズでタンパク質Aをプルダウンした。プルダウン後のビーズ抽出液について、SDS-PAGEを行い、タンパク質Aと相互作用すると考えられるタンパク質Bおよびタンパク質Cに対する抗体を用いてウエスタンブロットを行い、タンパク質A、B、Cの物理的相互作用を解析した。

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試験概要

1工数のFTE試験として、下記 ①～③ の内容を委託者のご要望に沿ったかたちで実施した。
① ファージディスプレイにおけるパンニングの実施と濃縮過程のライブラリーDNAの調製、② 細胞からの抗体遺伝子のクローニングとプラスミドベクターの構築、③ ハイブリドーマの培養上清からの抗体の簡易精製と純度確認

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CHO系細胞にHis-tag標識されたタンパク質Aを一過性発現させ、培養上清からTALONレジンによりタンパク質Aをアフィニティー精製した。そして、タンパク質Aに対する抗体を用いたウエスタンブロット解析を行い、精製物が抗体によって認識されることを確認した。

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目的遺伝子を哺乳類細胞において発現させるプラスミドベクターを構築した。それをヒト大腸がん細胞株へリポフェクションにより導入し、薬剤耐性となった細胞をクローン化した。クローン細胞において、目的遺伝子の発現をリアルタイムPCRにより測定し、発現量の高かった5クローンを提出した。

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試験概要

2種類の浮遊系細胞について、エレクトロポーレーションによる遺伝子導入の検討、ならびに、選択薬剤の至適濃度の検討を行った。そして、最適化された条件でプラスミドベクターを導入後、薬剤選択を行い、薬剤耐性を示し、プラスミドが安定導入された細胞を提出した。

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試験概要

提供いただいた特殊な細胞に12種類のレンチウイルベクターをそれぞれ感染させ、薬剤選択を行い、薬剤耐性となった感染細胞の凍結ストックを調製し、提出した。

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試験概要

哺乳類細胞において、シグナルAに応答する配列の制御下でヒト分泌性アルカリ性フォスファターゼ (SEAP) を発現させるプラスミドベクターを構築した。そのプラスミドを細胞へ導入し、安定導入された細胞を樹立した。樹立した細胞について、シグナルAを活性化させる刺激を与え、分泌されるSEAPの活性を蛍光測定により評価した。

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試験概要

化粧品素材を表皮角化細胞に添加した際の細胞生存率を調べ、細胞傷害性を評価した。

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試験概要

細胞6種に対し標的遺伝子をアンチセンスオリゴによりノックダウンし、ノックダウンによる影響を細胞生存率、アポトーシス及び関連遺伝子の発現量を調べることで評価した。

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試験概要

ある癌においては、タンパク質Dの発現と、Dの受容体である膜タンパク質Aの細胞膜への発現量が増加している。膜タンパク質Aの細胞膜上の発現量を定量する方法を確立するために、細胞膜上のタンパク質をビオチン化し、ビオチン化タンパク質をアビジンビーズによりプルダウンした。プルダウンされたビオチン化タンパク質中のAをウエスタンブロットにより検出し、膜タンパク質Aの細胞膜上の存在比を測定する方法を確立した。この解析を30種の癌細胞株について行った。また、タンパク質Dの発現も、これらの癌細胞株で検討した。

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試験概要

膜タンパク質Aの発現を抑制するためのshRNAを発現するレンチウィルスを作製した。膜タンパク質Aが細胞膜に高発現あるいは低発現している細胞株それぞれ6種に、作製したレンチウィルスを感染させ、shRNAを発現する細胞を選択した。膜タンパク質Aのノックダウンが各癌細胞の増殖に与える影響を検討した。

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試験概要

大腸癌あるいは肺癌由来の細胞株について、タンパク質Xのチロシンリン酸化レベルをウェスタンブロットで解析した。また、その遺伝子XをノックダウンするためにshRNA発現用レンチウイルスを作製した。遺伝子Xのノックダウンが各癌細胞株の足場非依存性増殖に与える影響を検討した。

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試験概要

ある疾患の原因として、肺や肝臓における細胞死が考えられている。この細胞死の誘導に関わる遺伝子Xの発現を抑制する薬の開発を目的とした。①HEK293細胞を用い、qPCRおよびウエスタンブロットにより、siRNAやアンチセンスオリゴの配列を比較選択した。②肺や肝臓由来の細胞株や初代培養を用い、遺伝子Xの発現上昇が見られる細胞死誘導系を確立した。③②の系を用いて、①で選択したsiRNAやアンチセンスオリゴが、細胞死誘導に関連する機能を抑制できるか検討した。

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試験概要

ウイルスがコードする酵素のFLAGタグ融合タンパク質を哺乳類浮遊細胞で発現させ、アフィニティー精製を行った。精製された酵素の活性を測定し、活性が保持された高純度の酵素が精製されたことを示した。

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試験概要

FLAGタグあるいはGST融合タンパク質6種について、哺乳類浮遊細胞1 Lスケールで発現させ、アフィニティー精製を行った。

対応業界

試験概要

ヒト酵素のHisタグ付きタンパク質を哺乳類細胞で発現させるプラスミドベクターを構築した。構築したプラスミドを哺乳類浮遊細胞に導入し、目的タンパク質の産生条件を検討した。さらに、目的タンパク質のアフィニティー精製条件を検討した。

対応業界

試験概要

ヒト酵素のHisタグ付きタンパク質を哺乳類浮遊細胞で発現させ、2 L培養分の細胞を用いて、大量精製を行った。

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試験概要

増殖因子刺激によるERKリン酸化を検出するアッセイ系を確立するために、AlphaLISAキットを用いて増殖因子量依存的リン酸化の検討を行った。

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試験概要

増殖因子刺激による受容体チロシンキナーゼの二量体化を検出するアッセイ系を確立するために、化学発光検出キットを用いて増殖因子量依存性を検討した。

対応業界

試験概要

増殖因子による遺伝子発現誘導を検出するアッセイ系を確立するために、レポーターアッセイにより増殖因子量依存性を検討した。

対応業界

試験概要

被験物質が毛乳頭細胞を活性化する効果を持つかを検討するために、ヒト頭髪由来の毛乳頭細胞で細胞増殖や増殖因子の産生を測定した。

対応業界

試験概要

食品原材料から抽出した分離画分5種が保湿効果を示す可能性があるか検討するために、正常成人皮膚由来線維芽細胞のコラーゲン産生に与える影響を、培養上清を用いたELISAにより検討した。

対応業界

試験概要

被験物質が血管機能改善効果を示す可能性があるか検討するために、ヒト臍帯静脈内皮細胞のNO産生やサイトカイン産生に与える影響を検討した。

対応業界

試験概要

核酸医薬品候補の血清中安定性、in vitro培養系でのノックダウン(KD)効率、in vivoサンプルでのKD効率をreal-time PCRにより評価した。加えて、安定発現細胞株の作製、in vitro translationなども行った。

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試験概要

3種類のHLAタンパク質を発現する発現ベクターを構築し、ヒト癌細胞株にトランスフェクションして安定発現細胞株を樹立した。目的タンパク質の発現を、共焦点レーザー顕微鏡とフローサイトメーターにより確認し、シングルクローン化した。

対応業界

試験概要

委託者が開発中の臨床検査機器を搬入・設置し、SOPを整備したうえ、人工血液を使用して海外申請用データを取得した。

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試験概要

天然物からの抽出物をハムスター皮脂腺細胞に添加し、皮脂合成能および細胞増殖能を評価した。

対応業界

試験概要

麹菌を培養し、培養液を熱処理して菌を死滅させた。調製した死菌サンプルを提出した。

対応業界

試験概要

特殊加工されたフィルム表面のみに菌液を滞留させ、一昼夜後の菌体濃度を測定して殺菌能力を評価した。

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試験概要

哺乳類培養細胞から核を単離し、核抽出液に含まれる特定の核タンパク質を抗体アフィニティクロマトグラフィーにより単離・精製した。

対応業界

試験概要

293系細胞に様々な種類の組換え抗体発現ベクターを構築後、細胞へ一過性導入し、培養上清に分泌された組換え抗体の発現条件の検討を行った。発現が確認された組換え抗体についてアフィニティクロマトグラフィーによる精製を実施した。

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試験概要

293系細胞にFab抗体重鎖および軽鎖発現ベクターを構築後、細胞へ一過性導入し、培養上清に分泌された組換えFab抗体の発現を検討した。発現した組み換えFab抗体はアフィニティクロマトグラフィーにより精製精製した。

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試験概要

哺乳類細胞発現系、昆虫細胞発現系およびコムギ胚芽無細胞タンパク質合成系を用いて膜タンパク質を発現させた。膜画分を抽出し、ニッケルアフィニティクロマトグラフィーにより膜タンパク質を粗精製した。

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試験概要

委託者が開発した検体測定用試作機を搬入・設置し、長期間継続的に検体を測定することで試作機の評価データを取得した。

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試験概要

検体から特定の細胞を単離し、得られた細胞についてフローサイトメトリーを用いて解析した。

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試験概要

標的酵素遺伝子を発現させた培養細胞からニッケルアフィニティクロマトグラフィーにより酵素タンパク質を精製した。精製した酵素に対してプロテアーゼを処理することで酵素を活性化した後、その酵素活性を測定した。

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試験概要

BioProfileFLEX2を用いた細胞培養液の分析を行った。500 μL程度の培養液中のグルコース、乳酸、グルタミン、グルタミン酸、NH4＋、Na+、K+、Ca++の代謝4項目、電解質4項目を測定した。サンプル受領から5営業日以内に測定結果を提出した。

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試験概要

JIS Z 2801:2010（ISO 22196:2007）を準拠して、非病原性大腸菌を用いて表面加工フィルムの抗菌活性を評価した。

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試験概要

比色法を用いて試験用品中のエンドトキシンを定量した

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試験概要

ご提供いただいた微生物の胞子懸濁液について、特定タンパク質の分解活性および各種プロテアーゼ阻害剤による活性阻害を解析した。また、キチンに対する分解活性を測定した。

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試験概要

3種類の被験物質が、正常ヒト表皮角化細胞の1種類の遺伝子発現に与える影響をqRT-PCRにて検討した（N=2）。

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試験概要

正常ヒト真皮線維芽細胞のおける、2種類の遺伝子発現を、qRT-PCRにより測定した (N=2)。3種類の被験物質の影響、アンチセンスオリゴを用いたノックダウン効果などを評価した。

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試験概要

ご提供いただいた5種類の癌細胞株、それぞれについて拡大培養を行い、その後、RNAの抽出、精製を行った。
併せて、培養上清、細胞ペレットを調製し、提出した。

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試験概要

14化合物が、オレイン酸存在下でのHepG2細胞のトリグリセリド産生に与える影響を、濃度1点、N=2で、市販のキットを用いて検討した。

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試験概要

細胞外プロテアーゼの活性に与える影響を、27化合物について、1濃度、N=2で、市販のキットを用いて検討した。

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試験概要

抗体医薬の開発において、発現ベクター、発現方法および精製方法の改良を行い不安定な構造の目的タンパクの精製に成功した。原料(培養上清)には凝集体を含む雑多な夾雑タンパク質が含まれていることが観察され、この除去をゲルろ過で行うことを提案されていた。しかし、ゲルろ過工程では想定以上の原料が必要となり、また、提出する精製抗体の濃度が低くなること、さらには実際のゲルろ過工程で目的タンパクの分解が観察され目的タンパク質の提出は出来なかった。そこで、目的タンパク質である4量体の新たな精製方法を検討した。その結果、アフィニティ精製時の使用カラムおよび溶出条件、その後の凝集体分解処理方法の開発、透析による夾雑タンパク質の除去方法の開発に成功し、高濃度の精製タンパク質を提出できた。また本組換え抗体は大変不安定であることが判明し、構造の改良を行うことを提案した。

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